Isolation of high quality RNA from soil-grown Ilex paraguariensis roots suitable for next-generation sequencing and gene expression analyses

Extraction of high quality RNA is a prerequisite for downstream application in functional genomics analyses. However, the extraction and purification of pure nucleic acids from root tissues is generally difficult due to the high concentration of carbohydrates and secondary metabolites. Furthermore, the presence of enzymatic inhibitors such as fulvic and humic acids can also negatively affect extraction quality, when extracting from clay soil-grown roots. In this work, total RNA was extracted from soil-grown roots of Ilex paraguariensis using four commercially available kits: SpectrumTM, RNeasy®, TRI Reagent®, and SV Total RNA Isolation System. Spectral measurement and electrophoresis were used to demonstrate RNA quality and quantity. The SpectrumTM and RNeasy® protocols provided the highest quantity and quality of RNA; however, the former revealed superior extraction performance. Consequently, total RNA was extracted from the roots of non-stressed and drought-stressed plants using the SpectrumTM method and six RNA-seq libraries were prepared from polyA + mRNAs by means of TruSeq mRNA library construction protocol to convert RNA to complementary DNA (cDNA). More than 80 million raw read sequences were obtained from each condition with an average read length of 150 bp. The yield and quality of the total RNA were consistently high and the RNA could be used for further analyses as demonstrated by cDNA library construction, RT-PCR, and transcriptome sequencing. Thus, SpectrumTM method can be used to isolate high quality RNA from roots of normal and drought stressed I. paraguariensis plants.Fil: Avico, Edgardo Hernán. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Acevedo, Raúl Maximiliano. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Departamento de Física y Química; ArgentinaFil: Calzadilla, Pablo Ignacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Ruiz, Oscar Adolfo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Sansberro, Pedro Alfonso. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; Argentin

Assessment of reference genes for real-time quantitative PCR normalization in Ilex paraguariensis leaves during drought

Reverse transcription of RNA followed by real-time quantitative PCR (qPCR) is to date the most reliable method for gene expression studies. However, to control the errors introduced along the numerous experimental procedures, it requires a normalization using internal reference genes with stable expression. To address this issue, nine candidate reference genes were investigated in Ilex paraguariensis leaves subjected to water stress. To facilitate the selection, we analysed the real-time qPCR data with three different software programs. The obtained results support the conclusion that RNA polymerase associated protein rtf1 homolog (RTF) combined with any of the following pairs is the most suitable triad of genes to compute a normalization factor: elongation factor 1-alpha + tubulin alpha chain (EF1a + α-Tub), actin + cyclophilin 38 (ACT + CYP38), or cyclophilin 38 + vacuolar protein sorting-associated protein 18 homologs (CYP38 + VPS). Our analysis constitutes the first in-depth study to identify the appropriate reference genes for the quantification of transcription in Ilex paraguariensis leaves during drought and provides essential information for further gene expression studies in this tree species.Fil: Acevedo, Raúl Maximiliano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Avico, Edgardo Hernán. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Ruiz, Oscar Adolfo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús). Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús); ArgentinaFil: Sansberro, Pedro Alfonso. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; Argentin

Glomus intraradices improved salt tolerance in Prosopis alba seedlings by improving water use efficiency and shoot water content.

The present work was aimed at testing the hypothesis that mycorrhizal Prosopis alba, an economically impor tant tree species worldwide, presents increased salt-tolerance compared with non-mycorrhizal ones and at gaining insight into the possible mechanisms underlying that improvement. For this purpose, a randomized complete block experiment with two factors: mycorrhizal treatments with or without the arbuscular fungus Glomus intraradices and two salinity levels, 0 and 200 mM NaCl was performed. Plant growth in P. alba plants colonized by G. intraradices was less affected by salinity than that in non-arbuscular mycorrhizal (AM) plants, indicating that mycorrhizal colonization turned P. alba more tolerant to salinity. Photosynthesis was reduced by salinity in non-AM plants but not in AM ones.  Salini  ty caused a significant decrease in mean stomatal conductance and transpiration rate, in mycorrhizal plants, but not in uninoculated ones. In this work, we detected two main mechanisms intervening in the salt tolerance enhancement of P. alba by the inoculation with G. intraradices: a- maintaining the net photosynthesis level and b- control of the transpiration rate.  Taken together, the results suggest that inoculation with G. intraradices improves P. alba survival rates during the implantation period and seems to be a promising strategy to improve P. alba cultivation in saline lands.Fil: Scambato, Agustina Azul. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico la Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas - Instituto Tecnológico Chascomús. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas (sede Chascomús); Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental; ArgentinaFil: Echeverria, Mariela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas - Instituto Tecnológico Chascomús. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas (sede Chascomús); ArgentinaFil: Sansberro, Pedro Alfonso. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste (i); ArgentinaFil: Ruiz, Oscar Adolfo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas - Instituto Tecnológico Chascomús. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas (sede Chascomús); ArgentinaFil: Menendez, Ana Bernardina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas - Instituto Tecnológico Chascomús. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas (sede Chascomús); Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental; Argentin

Surface disinfectants for the in vitro establishment of Grevillea robusta nodal segments

La contaminación microbiana es un problema constante quecompromete el desarrollo de todas la técnicas in vitro. Las pérdidascausadas por microorganismos contaminantes principalmentehongos y bacterias constituyen un serio problema a escalamundial en los numerosos laboratorios. Por ello para determinarun protocolo de desinfección de segmentos nodales de Grevillearobusta provenientes de brotes recolectados de plantas mantenidasen invernadero, se ensayaron diferentes soluciones de desinfectante(hipoclorito de sodio, peroxosulfato acido de potasio,peróxido de hidrogeno, y dos fungicidas, oxicloruro de cobre ycarbendazim), en distintas concentraciones (de 0,5 a 10 g. L-1) ytiempos de exposición (15, 30 o 60 minutos). Los explantesfueron cultivados en un medio basal de Murasghige y Skoog. Alos 28 días de cultivo, se determinó porcentaje de contaminación,oxidación y supervivencia/establecimiento de los explantes.Si bien todos los tratamientos ensayados han permitido elestablecimiento de los cultivos entre un 36,67± 5,77 y un90,00±10 %; los mejores resultados se obtuvieron con un pre-tratamiento de NaClO 0,25 g. L-1 y Carbendazim 0,75 g. L-1 por15 minutos recomendándolo para un establecimiento exitoso,con un porcentaje de contaminación mínimo y un efecto fitotóxicoen cuanto a ennegrecimiento u oxidación de los tejidos, dentrode los parámetros razonables.Microbial contamination is a constant problem, which often compromises development of all in vitro techniques. The losses caused by contaminating microorganisms, mainly fungi and bacteria, are a serious worldwide problem in numerous laboratories. Thereby, to determine a protocol for the disinfection of nodal segments of Grevillea robusta from sprouts collected from greenhouse plants, different disinfectant solutions were tried (sodium hypochlorite; potassium hydrogen persulfate; hydrogen peroxide; and two fungicides, copper oxychloride and carbendazim), using different concentrations (between 0.5 and 10 g. L-1) and times of exposure (15, 30, and 60 minutes). The explants were cultivated in a basal medium of Murasghige and Skoog. At 28 days of culture, the percentages of contamination, oxidation and survival/establishment of all the explants were determined. Even though all treatments tested allowed establishment between 36.67± 5.77 and 90.00±10 %, the best results were obtained with a pretreatment using NaClO 0.25 g. L-1 and Carbendazim 0.75 g. L-1 for 15 minutes. Thus, this pre-treatment is recommended for a successful establishment, with a minimum percentage of contamination, and phytotoxic effects of blackening or tissue oxidation within reasonable parametersFil: Bogado, Facundo Ariel. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Vera Bravo, C.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; ArgentinaFil: Ayala, Paula Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Sansberro, Pedro Alfonso. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Luna, Claudia Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; Argentin

In vitro cultures of Vitis vinifera L. cv. Chardonnay synthesize the phytoalexin nerolidol upon infection by Phaeoacremonium parasiticum

This study investigated terpene synthase (TPS) activity and terpene antifungal metabolites in calluses and cell suspension cultures of Vitis vinifera cv. Chardonnay infected with Phaecremonium parasiticum, one of the fungi associated with the grapevine diseases known as “hoja de malvón” and young vine decline. The highest TPS activity, assessed as tritiated farnesyl pyrophosphate ([1-3H]-FPP) transformed into hexane-soluble radioactive products, was observed in both inoculated calluses and cell suspension cultures (CSC). When tested in inoculated cell suspension cultures the TPS activity was maximal at 8 h after [1-3H]-FPP application and then declined; this was associated with a temporary increase of the sesquiterpene nerolidol. Grape calluses produced: α-pinene, nerolidol and squalene whether or not they were inoculated with Pm. parasiticum. As fungal amount raised the relative concentration of α-pinene and nerolidol increased in respect to squalene in calluses. The TPS activity and nerolidol and α-pinene accumulation was correlated with the increase in the amount of inoculated fungus. Of the mentioned metabolites mainly squalene was identified from extracts of fungal cultures. The results suggest that the response of grapevine tissues to Pm. parasiticum is dependent on the pathogen concentration and is characterized by increasing TPS activity through de novo synthesis.Fil: Escoriaza, María Georgina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Cuyo Mendoza - San Juan. Estación Experimental Agropecuaria Mendoza; Argentina;Fil: Sansberro, Pedro Alfonso. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste (i); Argentina;Fil: Garcia Lampasona, Sandra Claudia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Cuyo Mendoza-San Juan. Estación Experimental Agropecuaria La Consulta; Argentina; Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Agrarias. Laboratorio de Biologia Molecular; Argentina; Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Mendoza; Argentina;Fil: Gatica, Marta. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Cuyo Mendoza - San Juan. Estación Experimental Agropecuaria Mendoza; Argentina;Fil: Bottini, Rubén. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Mendoza. Instituto de Biologia Agricola de Mendoza; Argentina; Universidad Nacional de Cuyo; Argentina;Fil: Piccoli, Patricia Noemi. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Mendoza. Instituto de Biologia Agricola de Mendoza; Argentina; Universidad Nacional de Cuyo; Argentina

A cryopreservation protocol for immature zygotic embryos of species of Ilex (Aquifoliaceae)

Tropical Ilex species have recalcitrant seeds. This work describes experiments demonstrating the feasibility of long-term conservation of Ilex brasiliensis, I. brevicuspis, I. dumosa, I. intergerrima, I. paraguariensis, I. pseudoboxus, I. taubertiana, and I. theezans through cryopreservation of zygotic rudimentary embryos at the heart developmental stage. The embryos were aseptically removed from the seeds and precultured (7 days) in the dark, at 27± 2ºC on solidified (0.8% agar) 1/4MS medium, [consisting of quarterstrength salts and vitamins of Murashige and Skoog (1962) medium] with 3% sucrose and 0.1 mg/l Zeatin. The embryos were then encapsulated in 3% calcium alginate beads and pretreated at 24 h intervals in liquid medium supplemented with progressively increasing sucrose concentrations (0.5, 0.75 and 1 M). Beads were dehydrated for 5 h with silicagel to 25% water content (fresh weight basis) and then placed in sterile 5 ml cryovials. Then the beads were either plunged rapidly in liquid nitrogen were they were kept for 1 h (rapid cooling) or cooled at 1ºC min-1 to -30ºC. Then the beads were immersed in liquid nitrogen for 1 h (slow cooling). The beads were rewarmed by immersion of the cryovials for 1 min in a water bath thermostated at 30ºC. Finally, beads were transferred onto culture medium (1/4MS, 3% sucrose, 0.1 mg/l zeatin, solidified with 0.8% agar) and incubated in a growth room at 27 ± 2ºC under a 14 h light (116 μmol. m-2.s-1)/ 10 h dark photoperiod. Maximum recovery percentages between 15 and 83% (depending on de the species and the treatment) were obtained with the cryopreserved embryosFil: Mroginski, Luis Amado. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Sansberro, Pedro Alfonso. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Scocchi, Adriana M.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Luna, Claudia Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Rey de Badaró, Hebe Yolanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; Argentin

Flujos hídricos en plantaciones de Pinus taeda en el Nordeste Argentino

Forest plantations have always been at the center of discussions on account of their possible effects on water resources, mainly in regard to water consumption. Such debates are far from ended, and have currently achieved a highly significant new dimension. Firstly, because of the increase in the planted area and, secondly, due to the concern regarding water supply. It has become increasingly apparent that the natural availability of water is one of the most important issues related to the management of natural resources around the world. This concern involves many myths, interpretations and poor information. For this study, 3 plots of 1000 square meters were installed in a plantation of Pinus taeda established in the year 2012. There were measurements on the three plots. In one of the plots, 32 flow sensors were installed to evaluate the water consumption of the plantation. 3 rain collectors were installed in the grassland area to measure and collect the rainfall. 12 rain collectors were installed in the interior of the plantation. Finally 12 stemflow collectors were used to determine stemflow. The objective of this project is to characterize the water flows in plantations of Pinus taeda, through the rate of transpiration, distribution of precipitation, growth and efficiency in the use of water. Results from rainfall in the period of 12 months showed that of the total of 2471.8 mm global precipitation, 1838.2 mm corresponded to internal precipitation, 89.5 mm were stenflow and 544.3 mm were canopy intercepted, which represents, in percentage, 73.8 %; 3.9% and 22.3 % respectively in relation to global precipitation. Mulch interception was 2.1 %, being the translocation by the mulch 76.6 %. The interception value of this study carried out in a thinned forest, turned out to be lower than that of other authors in forests of greater density (Caldato, 2011; Zhang et al., 1999).Las plantaciones forestales siempre estuvieron en el centro de las discusiones en función de sus posibles efectos sobre los recursos hídricos, principalmente en lo referido al consumo de agua. Tales discusiones, lejos de concluir, alcanzaron actualmente una dimensión nueva y muy significativa. Primero, en función del aumento del área plantada y, por otro lado, por la preocupación en cuanto al abastecimiento de agua potable. Se torna cada vez más evidente el hecho de que la disponibilidad natural de agua constituye uno de los más importantes temas relacionados al manejo de los recursos naturales en todo el mundo. Esta inquietud involucra muchos mitos, interpretaciones, e información precaria al respecto. Para el presente estudio, se instalaron 3 parcelas de 1 000 metros cuadrados en una plantación de Pinus taeda establecida el año 2012. Sobre las tres parcelas se realizaron mediciones dasométricas. En una de las parcelas, se instalaron 32 sensores de flujo de savia para evaluar el consumo de agua de la plantación. Para la medición de la precipitación, se instalaron 3 pluviómetros a cielo abierto y 12 dentro de la parcela de estudio. Finalmente, para el escurrimiento por el tronco se instalaron 12 colectores de precipitación caulinar. El objetivo del proyecto es caracterizar los flujos hídricos en plantaciones de Pinus taeda, a través de la tasa de transpiración, distribución de la precipitación, el crecimiento y la eficiencia del uso del agua. Los resultados del régimen de lluvias en el período de 12 meses mostraron que del total de 2 471.8 mm de precipitación global, 1 838.2 mm correspondieron a la precipitación interna, 89.5 mm fueron escurrimiento por el tronco y 544.3 mm quedaron retenidos por intercepción, lo que representa, en porcentaje, 73.8 %; 3.9 % y 22.3 %, respectivamente, en relación a la precipitación global. La intercepción del mantillo fue de 2.1 %, siendo la translocación por el mantillo 76.6 %. El valor de interceptación de este estudio realizado en un bosque raleado, resultó menor al de otros autores realizados en bosques de mayor densidad (Caldato, 2011; Zhang et al., 1999)

Construcción de un mapa genético preliminar de yerba mate (Ilex paraguariensis): construction of a preliminary genetic linkage map of yerba mate (Ilex paraguariensis)

Las hojas de la yerba mate se utilizan para la preparación del mate, una infusión de profunda raigambre histórica, social y cultural en sudamérica. Su cultivo reviste importancia estratégica para varios países de la región, especialmente Argentina, Brasil y Paraguay. Nuestro objetivo fue establecer una población segregante y construir un mapa de ligamiento genético preliminar de esta especie para facilitar la futura identificación de loci asociados con caracteres de interés agronómico. Dos genotipos genéticamente divergentes con comportamiento contrastante respecto a la tolerancia a sequía se seleccionaron como progenitores femenino y masculino. Mediante cruzamientos controlados y rescate de embriones, se estableció una población F tipo 1 ?pseudo-test cross? de 700 individuos, con potencial para extenderse hasta 1900. Un subgrupo de 117 plantas fue empleado para construir un mapa genético marco. Se ensayaron 5 combinaciones de cebadores de AFLP y 16 cebadores de RAPDs, para generar 119 marcadores informativos, de los cuales el 68,9% se ajustó a los valores de segregación mendeliana esperados. El análisis de ligamiento se realizó con el programa JoinMap 3.0. Los marcadores originados en cada progenitor se analizaron independientemente para generar un mapa femenino formado por 11 grupos de ligamiento y otro masculino con 16 grupos. Las distancias genéticas cubiertas por los mismos fueron de 223 cM y 678 cM, respectivamente. Este trabajo permitió establecer una progenie de mapeo segregante para yerba mate y construir un mapa genético preliminar que podrá usarse como base para la futura identificación de marcadores ligados a genes de interés agronómico.The “yerba mate” leaves are used to make an infusion named “mate tea”, which is deeply rooted in the historical, social and cultural tradition of South America. Its sustainable use is of strategic significance to several countries of this region, particularly Argentina, Brazil and Paraguay. Our objective was to establish a segregating population and build a framework genetic map, in order to contribute to the future identification of loci associated with desirable traits. Two genetically divergent genotypes with contrasting drought tolerance capacity were selected as female and male parents. A “pseudo-test cross” F1 population of 700 individuals, with potential to be extended to 1900 individuals, was produced after controlled crossing followed by embryo rescue. A subset of 117 plants was used to produce a framework genetic map. Five AFLP primer combinations and 16 RAPD primers generated 119 informative markers, out of which 68.9% showed the expected Mendelian segregation values. Linkage analyses were carried out by using Joinmap 3.0. Markers originated from each progenitor were independently evaluated to generate a female map including 11 linkage groups and a male one with 16 linkage groups. Total genetic distances covered by the female and male maps were 223 cM and 678 cM, respectively. This work allowed the establishment of a yerba mate segregating population and the construction of a preliminary genetic map, which will be used as a framework for the future identification of markers linked to genes of interest.Fil: Stein, Juliana. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Luna, Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste (i); ArgentinaFil: Espasandin, Fabiana Daniela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste (i); ArgentinaFil: Sartor, Maria Esperanza. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste (i); ArgentinaFil: Espinoza, Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste (i); ArgentinaFil: Ortiz, Juan Pablo Amelio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste (i); Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Sansberro, Pedro Alfonso. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste (i); ArgentinaFil: Pessino, Silvina Claudia. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentin

Construction of a preliminary genetic linkage map of yerba mate (Ilex paraguariensis)

Las hojas de la yerba mate se utilizan para la preparación del mate, una infusión de profunda raigambre histórica, social y cultural en Sudamérica. Su cultivo reviste importancia estratégica para varios países de la región, especialmente Argentina, Brasil y Paraguay. Nuestro objetivo fue establecer una población segregante y construir un mapa de ligamiento genético preliminar de esta especie para facilitar la futura identificación de loci asociados con caracteres de interés agronómico. Dos genotipos genéticamente divergentes con comportamiento contrastante respecto a la tolerancia a sequía se seleccionaron como progenitores femenino y masculino. Mediante cruzamientos controlados y rescate de embriones, se estableció una población F tipo 1 “pseudo-test cross” de 700 individuos, con potencial para extenderse hasta 1900. Un subgrupo de 117 plantas fue empleado para construir un mapa genético marco. Se ensayaron 5 combinaciones de cebadores de AFLP y 16 cebadores de RAPDs, para generar 119 marcadores informativos, de los cuales el 68,9% se ajustó a los valores de segregación mendeliana esperados. El análisis de ligamiento se realizó con el programa JoinMap 3.0. Los marcadores originados en cada progenitor se analizaron independientemente para generar un mapa femenino formado por 11 grupos de ligamiento y otro masculino con 16 grupos. Las distancias genéticas cubiertas por los mismos fueron de 223 cM y 678 cM, respectivamente. Este trabajo permitió establecer una progenie de mapeo segregante para yerba mate y construir un mapa genético preliminar que podrá usarse como base para la futura identificación de marcadores ligados a genes de interés agronómico.Fil: Stein, Juliana. Universidad Nacional de Rosario; ArgentinaFil: Luna, Claudia Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Espasandin, Fabiana Daniela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Sartor, Maria Esperanza. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Espinoza, Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Ortiz, Juan Pablo Amelio. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Sansberro, Pedro Alfonso. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Pessino, Silvina Claudia. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentin

Transcriptome dynamics of rooting zone and leaves during in vitro adventitious root formation in eucalyptus nitens

Wood properties and agronomic traits associated with fast growth and frost tolerance make Eucalyptus nitens a valuable forest alternative. However, the rapid age-related decline in the adventitious root (AR) formation (herein, meaning induction, initiation, and expression stages) limits its propagation. We analyzed transcriptomic profile variation in leaves and stem bases during AR induction of microcuttings to elucidate the molecular mechanisms involved in AR formation. In addition, we quantified expressions of candidate genes associated with recalcitrance. We delimited the ontogenic phases of root formation using histological techniques and Scarecrow and Short-Root expression quantification for RNA sequencing sample collection. We quantified the gene expressions associated with root meristem formation, auxin biosynthesis, perception, signaling, conjugation, and cytokinin signaling in shoots harvested from 2- to 36-month-old plants. After IBA treatment, 702 transcripts changed their expressions. Several were involved in hormone homeostasis and the signaling pathways that determine cell dedifferentiation, leading to root meristem formation. In part, the age-related decline in the rooting capacity is attributable to the increase in the ARR1 gene expression, which negatively affects auxin homeostasis. The analysis of the transcriptomic variation in the leaves and rooting zones provided profuse information: (1) To elucidate the auxin metabolism; (2) to understand the hormonal and signaling processes involved; (3) to collect data associated with their recalcitrance.Instituto de BiotecnologíaFil: Ayala, Paula Gabriela. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste. Laboratorio de Biotecnología Aplicada y Genómica Funcional; ArgentinaFil: Ayala, Paula Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ayala, Paula Gabriela. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Concordia; ArgentinaFil: Acevedo, Raúl M. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste. Laboratorio de Biotecnología Aplicada y Genómica Funcional; ArgentinaFil: Acevedo, Raúl M. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Luna, Claudia Verónica. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste. Laboratorio de Biotecnología Aplicada y Genómica Funcional; ArgentinaFil: Luna, Claudia Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Rivarola, Maximo Lisandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Acuña, Cintia Vanesa. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Marcucci Poltri, Susana Noemi. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: González, Ana M. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste. Laboratorio de Biotecnología Aplicada y Genómica Funcional; ArgentinaFil: González, Ana M. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Sansberro, Pedro Alfonso. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste. Laboratorio de Biotecnología Aplicada y Genómica Funcional; ArgentinaFil: Sansberro, Pedro Alfonso. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin